中国中药杂志

2019, v.44(14) 3015-3021

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杭菊CHI基因的克隆及原核表达
Cloning and prokaryotic expression of CHI in Chrysanthemum morifolium cv.'Hangju'

王蕊;邹庆军;郭巧生;汪涛;程搏幸;

摘要(Abstract):

从杭菊转录组数据库中筛选并通过PCR技术成功克隆得到3条杭菊査尔酮异构酶基因(Cm CHI)分别命名为:CmCHI1,Cm CHI2,Cm CHI3。生物信息学分析表明:Cm CHI1~3开放阅读框的碱基数分别为708,633,681 bp分别编码235,210,226个氨基酸。利用原核表达技术成功诱导得到3条30 k Da左右的融合蛋白,同时使用Ni-NTA树脂柱分离纯化得到相应的重组融合蛋白。聚类分析表明,筛选得到的3条Cm CHI与菊科植物同源性较高,Cm CHI1与Cm CHI3属于Ⅰ型CHI; Cm CHI2属于Ⅳ型CHI。以β-actin为内参基因,使用RT-qPCR检测并分析Cm CHI1~3基因在杭菊中的表达量差异,结果表明Cm CHI1,Cm CHI3表达量较高,Cm CHI2表达量较低;淹水处理能显著促进Cm CHI1,Cm CHI3基因的表达,而对Cm CHI2无调控作用,由此得出CmCHI1,Cm CHI3是主要参与杭菊黄酮类化合物合成的查尔酮异构酶基因,Cm CHI2为辅助基因。以上研究结果为进一步研究CHI基因在杭菊黄酮类化合物代谢中的分子调控机制提供依据,从而为提高杭菊黄酮含量及最终提高杭菊药用品质奠定基础。

关键词(KeyWords): 杭菊;黄酮类化合物;查尔酮异构酶;原核表达;表达分析

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金青年基金项目(81503180);; 中央高校基本科研业务费专项资金项目(KJQN201643,KYZ201608)

作者(Author): 王蕊;邹庆军;郭巧生;汪涛;程搏幸;

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